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公司動態(tài)首頁 > 公司動態(tài) PEI轉染試劑的配制步驟全解析
  • PEI轉染試劑的配制步驟全解析
  • 點擊次數(shù):83 更新時間:2025-02-26
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  •   在基因治療、細胞轉染等眾多生物醫(yī)學研究中,PEI轉染試劑發(fā)揮著關鍵作用。以下是它的詳細配制步驟。
      材料和試劑準備
      在進行PEI轉染試劑的配制前,需要準備好相關材料和試劑。包括高純度的線性PEI粉末、合適的緩沖液(如HEPES緩沖液)、核酸樣品(如質粒DNA)以及適量的水等。
      第一步:配制PEI溶液
      稱取適量的線性PEI粉末,通常根據(jù)所需濃度和轉染體系來確定具體用量。一般來說,可將0.5 - 1 g的PEI粉末溶解于適量的無水乙醇中(例如5 - 10 mL),攪拌至全部溶解,得到PEI乙醇溶液。注意要在通風良好的環(huán)境下操作,因為乙醇具有一定的揮發(fā)性。
      第二步:脫醇處理
      將PEI乙醇溶液緩慢加入到大量預冷的去離子水中(例如100 - 200 mL),邊加邊攪拌,使乙醇充分揮發(fā),得到無醇的PEI溶液。這一步非常關鍵,因為乙醇可能會對后續(xù)的細胞產(chǎn)生毒害作用。
      第三步:調節(jié)pH值
      使用pH計測量PEI溶液的pH值,并將其調節(jié)至合適的范圍(通常在7.0 - 7.5之間)。可以使用1 M的NaOH或HCl溶液進行滴定調節(jié),同時不斷攪拌溶液,使pH值穩(wěn)定在目標范圍內。
      第四步:確定轉染濃度
      根據(jù)轉染實驗的具體需求,進一步稀釋PEI溶液至合適的濃度。一般來說,常用的轉染濃度范圍為1 - 5 μg/mL。
      第五步:加入核酸樣品
      在含有適量細胞培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)板中,加入準備好的核酸樣品(如質粒DNA),然后緩慢加入配制好的PEI溶液,使核酸與PEI按照適當?shù)哪柋龋ㄍǔ?:3 - 1:5)混合,輕輕混勻。
      第六步:靜置孵育
      將轉染混合體系放置在37℃、5% CO?的培養(yǎng)箱中靜置孵育一段時間(一般為4 - 6小時),使PEI與核酸充分結合并進入細胞。
      第七步:更換培養(yǎng)液
      孵育結束后,小心地吸出舊的培養(yǎng)液,加入新鮮的全部培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)細胞。
     

     

      通過嚴格按照上述步驟進行PEI轉染試劑的配制,可提高轉染效率,為后續(xù)的基因治療和細胞研究提供有力保障。
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